112.247.109.102：以“抗菌药对细菌性传染病的控制起到了非常重要的作用，但由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗菌药，很多致病...”为内容创建页面

2014-01-25T22:33:37Z

以“抗菌药对细菌性传染病的控制起到了非常重要的作用，但由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗菌药，很多致病...”为内容创建页面

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[[抗菌]]药对[[细菌]]性[[传染病]]的控制起到了非常重要的作用，但由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗菌药，很多[[致病性]]细菌产生了[[耐药性]]，使得抗菌药对细菌性[[疾病]]的控制效果越来越差，不但造成药物浪费，而且还延误病情，给养殖户造成了很大的经济损失。

随着新型[[致病菌]]的不断出现，抗菌药的防治效果越来越差。并且各种致病菌对不同的[[抗菌药物]]的敏感性不同，同一细菌的不同[[菌株]]对不同抗菌药物的敏感性也有差异。长期以来，各种致病菌耐药性的产生使各种常用抗菌药物往往失去药效，以及不能很好的掌握药物对细菌的敏感度，所以一个正确的结果，可供临床医师选用抗菌药物的参考，并提高疗效。这就需要利用药敏实验进行药物敏感度的测定，以便准确有效的利用药物进行治疗。但由于药敏试验要求比较严格，条件比较高，仅仅在大中专院校或科研单位有条件的可以操作，一些养殖厂或一些[[门诊]]难有条件进行药敏试验的操作。针对这个问题，农业部动物检疫所青岛易邦生物工程有限公司动物[[疫病]]诊疗中心经过几年的总结和实践，逐渐总结出几套适合基层进行药敏试验的操作方法，现简单介绍如下。　　
==实验步骤==

===一、实验材料===
普通营养琼脂[[培养基]]：可去[[生化]][[试剂]]店购买，做不同细菌的药敏试验可选择不同的培养基，如做[[大肠杆菌]]的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦糠凯培养基。做[[沙门氏菌]]可选择[[血清]]培养基。

药敏[[试纸]]：购买或自制（详见实验准备）

细菌：待做药敏试验的细菌

仪器：[[接种环]]、[[酒精灯]]、打孔器、牛津杯、移液器、滴头　　
===二、实验准备===
2.1　药敏片的准备：购买或自制

2.1.1　制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的[[青霉素]]空瓶中，瓶口以单层牛皮纸[[包扎]]。经15磅-20分钟[[高压]][[消毒]]后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。

2.1.2　抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可[[真空干燥]]。切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6个月。

2.2　药液的制备（用于商品药的试验）：按商品药的使用治疗量的比例配制药液；如商品药百病消按其说明量治疗量0.01%饮水，可按这个比例配制药液，可取10毫克加入10毫升的水中混匀。此[[稀释液]]即为用于做药敏试验的药液。　　
===三、实验操作方法===
3.1　药敏片法

3.1.1　在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰[[灭菌]]的接种环挑取适量[[细菌培养]]物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。（另：可挑取待试细菌于少量[[生理盐水]]中制成细菌[[混悬液]]，用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。要求涂布均匀致密）

3.1.2　将[[镊子]]于酒精灯火焰灭菌后略停，取药敏片贴到平皿培养基表面。为了使药敏片与培养基紧密相贴，可用镊子轻按几下药敏片。为了使能准确的观察结果，要求药敏片能有规律的分布于平皿培养基上；一般可在平皿中央贴一片，外周可等距离贴若干片（外周一般可贴七片），每种药敏片的名称要记住。

3.1.3　将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时后，观察效果。

3.2　牛津杯法


3.2.1　在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。（另：可挑取待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。要求涂布均匀致密。）

3.2.2　以[[无菌操作]]将灭菌的不锈钢小管（内径6nm、外径8nm、高10nm的圆形小管，管的两端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培养基上，轻轻加压，使其与培养基接触无空隙，并在小管处标记各种药物名称。每个板可放4-6支小管。待分钟后，分别向各小管中滴加一定数量的各种药液，勿使其外溢。置37℃培养8-18小时，观察结果。

3.2.3　将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时后，观察效果。

3.3　打孔法：

该法较简单，成本低，易操作，比较适用于商品药物的检测。

3.3.1　在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。（另：可挑取待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。要求涂布均匀致密。）

3.3.2　以无菌操作将灭菌的不锈钢小管（外径为4毫米、孔径与孔距均为3毫米，管的两端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培养基上打孔，将孔中的培养基用针头挑出，并以火焰封底，使培养基能充分的与平皿融合（以防药液渗漏，影响结果）。

3.3.3　加样：按不同药液加样，样品加至满而不溢为止。

3.3.4　将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时后，观察效果。　　
==结果观察==
在涂有细菌的[[琼脂]]平板上，抗菌药物在琼脂内向四周扩散，其浓度呈梯度递减，因此在纸片周围一定距离内的细菌生长受到抑制。过夜培养后形成一个[[抑菌]]圈，抑菌圈越大，说明该菌对此药敏感性越大，反之越小，若无抑菌圈，则说明该菌对此药具有耐药性。其直径大小与[[药物浓度]]、划线细菌浓度有直接关系。　　
==判定标准==
一、药敏实验的结果，应按抑菌圈直径大小作为判定敏感度高低的标准。

表1　药物敏感实验判定标准

<table><tr><td>抑菌圈直径（毫米）</td><td>敏感度</td></tr><tr><td>20以上</td><td>极敏</td></tr><tr><td>15~20</td><td>高敏</td></tr><tr><td>10~14</td><td>中敏</td></tr><tr><td>10以下</td><td>低敏</td></tr><tr><td>0</td><td>不敏</td></tr></table>

二、药物敏感实验判定标准参考表1，[[多黏菌素]]抑菌圈；在9毫米以上为高敏，6-9毫米为低敏，无抑菌圈为不敏。　　
==影响药敏结果的因素==
一、培养基：应根据试验菌的营养需要进行配制。倾注平板时，厚度合适（约5-6mm），不可太薄，一般90mm直径的[[培养皿]]，倾注培养基18-20ml为宜。培养基内应尽量避免有抗菌药物的[[拮抗物]]质，如钙、镁离子能减低[[氨基糖苷类]]的抗菌活性，[[胸腺嘧啶核苷]]和[[对氨苯甲酸]]（PABA）能[[拮抗]][[磺胺药]]和TMP的活性。

二、[[细菌接种]]量：细菌接种量应恒定，如太多，抑菌圈变小，能产酶的菌株更可破坏药物的抗菌活性。

三、药物浓度：药物的浓度和总量直接影响抑菌试验的结果，需精确配制。商品药应严格按照其推荐治疗量配制。

四、培养时间：一般培养温度和时间为37℃ 8-18小时，有些抗菌药扩散慢如[[多粘菌素]]，可将已放好抗菌药的平板培养基，先置4℃冰箱内2~4小时，使抗菌药预扩散，然后再放37℃温箱中培养，可以推迟细菌的生长，而得到较大的抑菌圈。　　
==药敏试验的应用==
药物敏感实验后，应选择高敏药物进行治疗，也可选用两种药物协助使用，以减少[[耐药菌株]]。在选择高敏药物时应考虑药物的吸收途径，因为我们药敏实验是药液直接和细菌接触，而在给禽用药的时候，必须通过机体的吸收才能使药物达到一定的效果，所以在给禽用药时，高敏药物一定要配合适宜的给药方法，这样才会达到好的治疗效果。

药敏试验 - 版本历史

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