112.247.109.102：以“初代培养物开始第一次传代培养后的细胞，即称之为细胞系。如细胞系的生存期有限，则称之为有限细胞系（FiniteCel...”为内容创建页面

2014-01-26T15:28:45Z

以“初代培养物开始第一次传代培养后的细胞，即称之为细胞系。如细胞系的生存期有限，则称之为有限细胞系（FiniteCel...”为内容创建页面

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初代培养物开始第一次[[传代培养]]后的[[细胞]]，即称之为[[细胞系]]。如细胞系的生存期有限，则称之为有限细胞系（FiniteCellLine）；已获无限繁殖能力能持续生存的细胞系，称连续细胞系或无限细胞系{{百科小图片|bkb93.jpg|建立细胞系流程图}}（InfiniteCellLine）。无限细胞系大多已发生异倍化，具[[异倍体]][[核型]]，有的可能已成为恶性细胞，因此本质上已是发生转化的细胞系。无限细胞系有的只有永生性（或不死性），但仍保留[[接触抑制]]和无异体[[接种]]致癌性；有的不仅有永生性，异体接种也有致瘤性，说明已恶性化。由某一细胞系分离出来的、在性状上与原细胞系不同的细胞系，称该细胞系的亚系（Subline）。　　
==细胞系-概念分歧==
现行的人教社大纲版选修教材中是这样介绍[[细胞株]]和细胞系的：

[[原代培养]]的细胞一般传至10代左右就不容易传下去了，细胞的生长就会出现停滞，大部分[[细胞衰老]]死亡。但是有极少数的细胞能够度过“危机”而继续传下去，这些存活的细胞一般能够传到40--50代，这种[[传代]]细胞叫做细胞株。细胞株的遗传物质没有发生改变。当细胞传至50代以后又会出现“危机”，不能再传下去。但是有部分细胞的遗传物质发生了改变，并且带有[[癌变]]的特点，有可能在培养条件下无限制地传代下去，这种传代细胞称为细胞系。{{百科小图片|bkb94.jpg|GENE 细胞系}}在一些别的资料中，细胞株和细胞系的概念与我们教材上的说法正好相反。课标教材没有再介绍这一对概念。这又是为什么呢？人教社编辑包春莹老师（bcying）对这一疑点的解释：细胞系和细胞株，两者曾一度混用，导致有些文献中概念不清。下面所指的概念是现在国内外比较通用的，也是绝大多数研究者接受的观点。

原代培养物经首次传代成功即称为细胞系（CellLine），因此细胞系可泛指一般可能传代的细胞。其中能够连续传代的细胞叫做连续细胞系或无限细胞系，不能[[连续培养]]的称为有限细胞系。大多数[[二倍体细胞]]为有限细胞系。通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的[[培养物]]称为细胞株（CellStrain），也就是说，细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞[[增殖]]形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。　　
==细胞系-[[肿瘤细胞]]系==
这是现有细胞系中最多的一类，中国已建细胞系主要为这类细胞。肿瘤细胞系多由癌瘤建成，多呈类[[上皮]]型细胞，常已传几十代或百代以上，并具有不死性和异体接种致瘤性。

对已建成的各种细胞系或细胞株习惯上都给以名称；细胞的命名无严格统一规定，大多采用有一定意义缩写字或代号表示。但不论什么形式，均不宜太长，以便记忆和了解，今别举以下几种代表性的细胞名称供参考：{{百科小图片|bkb95.jpg|X[[射线]]诱导4种细胞系的DNA损伤与剂量的关系}}HeLa：为[[供体]]患者的姓名（来源于[[宫颈癌]]）

CHO：中国[[地鼠]][[卵巢]]细胞（ChineseHamsterOvary）

宫-743：宫颈癌[[上皮细胞]]，1974年3月建立

NIH3T3：美国国立卫生研究所（NationalInstituteofHealth）建立；每3天传代，每次接种3×105细胞／毫升。　　
==细胞系-建立细胞系的要求==
什么样的体外培养群可被认可为己鉴定的细胞，视具体情况而定，无统一规定。对于用作原代培养的细胞只要供体均一，取材部位及组织种类等条件稳定即可，如用做长期培养，特别是反复传代的细胞，常需做如下说明：

1、组织来源：细胞供体所属[[物种]]，来自人体或者动物；个体性别、年龄；取材的器官或组织。如系[[肿瘤]]组织，应说明临床和[[病理]]诊断，以及病历号等。

2、[[细胞生物学]]检测：

了解细胞一般和特殊的[[生物学性状]]，如细胞一般形态，特异结构，细胞生长曲线和分裂指数，[[倍增时间]]，[[接种率]]等。如为肿瘤细胞，为说明来源于原肿瘤组织并保持恶性，须做[[软琼脂培养]]，异体接种致瘤和对正常组织侵润力等实验。

3、培养条件和方法；应说明细[[胞系]]（或株）适应的生存环境，即指明使用的[[培养基]]、[[血清]]种类、用量以及适宜PH值。　　
==细胞系-建株要点和过程==
（一）肿瘤细胞培养技术要点

1、取材：材料主要来源于[[外科手术]]或活检瘤组织，取材时避免用坏死组织，要挑选瘤细胞集中和活力较好的部位，瘤性转移[[淋巴结]]或胸腹水是较好的培养材料。取材后尽快培养，因故不能立即培养者，可冻存。其培养方法及冻存方法同前述正常组织。

2、[[成纤维细胞]]排除：在肿瘤组织中常混杂有一些成纤维细胞，培养时能与瘤细胞同时生长，并常压过癌细胞，导致癌细胞生长受阻以至消失，应仔细排除。排除方法常有：机械刮除法、反复贴壁法、[[消化]]排除法、[[胶原酶]]消化法等。{{百科小图片|bkb96.jpg|[[红细胞系]]}}3、提高肿瘤细胞培养存活率和生长率

根据实验经验，肿瘤细胞在体外不易培养，建立能传代的肿瘤细胞系更为困难。一般当肿瘤组成或细胞被原代培养后，要经过对新环境的适应才能生长，因此不能局限于一般培养法，须采用一些特殊措施。如：用适宜[[底物]]，鼠尾[[胶原]]底层及饲细胞底层等。用[[细胞生长因子]]，根据细胞种类不同选用不同的促细胞[[生长因子]]，如[[胰岛素]]、[[氢化可的松]]，[[雌激素]]等。也可以考虑动物媒介培养。

（二）人类[[淋巴母细胞]]建株方法

l、4ml[[肝素]]抗凝血于[[离心管]]中，加入2mlRPMI1640。

2、混匀后沿管壁缓慢加到预置有4ml[[淋巴细胞分离液]]的液面上静置30min。

3、1500rpm，15min，吸取[[白细胞]]层（第二层）于另一离心管中。

4、加RPMI16405ml洗涤白细胞两次。

5、将白细胞接种至1mlRPMI1640培养基中，加入10μl环胞霉素和100μl的EBV（EB[[病毒]]）液，混匀。

6、[[水浴摇床]]，40次/分，37℃，3hr。

7、1500rpm，15min。将细胞接种至1ml培养基中（内含[[谷氨酰胺]]1mM／ml）加入10μl环胞霉素，轻轻混匀，37℃培养。

8、5天后观察细胞转化和生长情况，决定是否半量换液。一般半量换液l—2次，并维持环胞霉素的浓度。

9、待转化细胞数量明显上升，并出现细胞团块后，可转入25ml[[细胞培养]]瓶中，加1—2ml培养基，37℃培养10-15天，一般每隔3-4天观察一次，决定是否换液，传代。

10、细胞生长达一定数量后冻存，冻存前应进行核型分析和存档。　　
==细胞系-鉴定、管理和使用==
当一个细胞系建成后，中国常通过组织专家开鉴定会的形式予以鉴定，从学术角度考虑，此举实非必要。按国际惯例，只要研究认真负责地把有关资料在杂志或刊物上报道，详细介绍上述各项目即可。

以前因未建立统一的[[细胞库]]时，对已建立的细胞系（株）多由作者单位自行保管，有浪费人力、交流使用不便、细胞易污染和丢失等弊病。我国已初建成小规模贮存细胞机构，待获进一步发展，这对我国细胞培养必将有更大促进作用。{{百科小图片|bkb97.jpg|细胞系中的应用}}国际上美、英和日本等国已建有细胞库；美国已有美国标准细胞库或细胞银行（ATCC）和人遗传[[突变]]细胞库（HGMR）、细胞衰老细胞库（CAR）等，其中ATCC不仅是美国也世界最大的细胞库。ATCC下属有一组协作实验室和一个由众多专家组成的咨询委员会。ATCC也是美国国立[[癌症]]研究所（NCI）和美国卫生研究所中（NIH）的资源库，尤与NCI有密切的关系。ATCC也是[[世界卫生组织]]WHO的国际培养细胞文献中心。ATCC现液氮冻存有3200个已经过鉴定的细胞系（1992），其中包括来自正常人和各种[[疾病]]患者的[[皮肤]]成纤维细胞系；和来自不同物种的近75个[[杂交瘤]]细胞株。ATCC接纳来自世界各国已经鉴定的细胞予以贮存，同时也向世界各国的研究者或实验室免费提供研究用细胞（做盈利性研究时收费。）ATCC接纳入库细胞时，必须符合其入库标准，ATCC入库细胞要求检测项目如下：

培养简历：组织来源日期、物种、组织起源、性别、年龄、供体正常或异常健康状态、细胞已[[传代数]]等

冻存液：培养基和防冻液名称

细胞活力：[[融解]]前后细胞接种存活率和生长特性

[[培养液]]：培养基种类和名称（一般要求不含[[抗生素]]）、血清来源和含量

细胞形态：类型，如为上皮或成纤维细胞等，融解后细胞生长特性

核型：[[二倍体]]或[[多倍体]]，[[标记染色体]]的有无

无污染检测：包括[[细菌]]、[[真菌]]、[[支原体]]、[[原虫]]和病毒等

物种检测：检测[[同工酶]]，主要为G6PD和LDH，以证明细胞有否交叉污染以及[[反转录酶]]检测

[[免疫]]检测：一两种[[血清学]]检测

细胞建立者：建立者姓名；检测者姓名

[[分类:生物学]]

细胞系 - 版本历史

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