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[[原位杂交]]术（in situ hybridization）是一种[[核酸]][[分子杂交]]技术，它是通过检测细胞内mRNA和[[DNA]]序列片段，原位研究[[细胞]]合成某种[[多肽]]或[[蛋白质]]的基

{{图片|gunkb15v.jpg|[[大鼠]]肝大部切除后再生过程中[[增殖]]期[[肝细胞]]}}

图1－11 大鼠肝大部切除后再生过程中增殖期肝细胞

摄取3H标记的[[胸腺嘧啶核苷]][[放射自显影]]像

↑ 增殖期肝细胞核

因表达。其基本原理是根据两条[[单链]][[核苷酸]][[互补碱基]]序列专一配对的特点，应用已知[[碱基]]序列并具有[[标记物]]的[[RNA]]或DNA片段即核酸[[探针]]（probe），与[[组织切片]]或细胞内的待测核酸（RNA或DNA片段）进行杂交，通过标记物的显示，在光镜或电镜下观察目的mRNA或DNA的存在与定位。此项技术需首先制备某种核酸探针，其种类主要有三种：①利用大肝[[杆菌]][[重组]]带有目的[[基因]]的[[质粒]]DNA，制成互补DNA探针(cDNA);②应用[[限制性核酸内切酶]][[消化]]制成线性DNA模板，在体外[[转录]]获得反意RNA探针(cDNA);③依照待测核酸的[[核苷酸序列]]，应用DNA合成仪合成[[寡聚]]核苷酸探针。cRNA和cDNA的常用标记物有32S、32P、3H等[[放射性核素]]和[[荧光素]]、[[生物素]]、[[地高辛]]等非[[放射性物质]]。[[组织学]]应用的原位杂交术主要是[[染色体原位杂交]]和[[细胞原位杂交]]。前者是研究[[遗传]]基因、[[抗原]]基因、[[受体]]基因、[[癌基因]]等在[[染色体]]上的定位与表达；后者是研究细胞某种蛋白质的基因转录物mRNA在[[胞质]]内的定位与表达（图1－7，1－12）。核酸分子杂交术有很高的敏感性和特异性，它是[[免疫细胞化学]]的基础上，进一步从[[分子]]水平探讨细胞功能的表达及其调节机制的，已成为当前[[细胞生物学]]、分子[[生物学]]研究的重要手段。

{{图片|gunkb409.jpg|原位杂交术光镜像 }}

图1－12 原位杂交术光镜像

A 32P标记[[胰岛素]]cRNA探针放射自显影显示大鼠[[胰岛]]B细胞内胰岛素mRNa

B 地高辛－[[碱性磷酸酶]]标记胰岛素cRNA探针显示大鼠胰岛B细胞内胰岛素mRNA

C 地高辛－碱性磷酸酶标记[[心钠素]]cRNA探针显色示体外培养的人[[胎儿]][[脐静脉]]

[[内皮细胞]]内的心钠素mRNA ×850

（第三军医大学蔡文教授供图）
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组织学/原位杂交术 - 版本历史

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