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2014-02-05T09:56:58Z

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'''层析'''(chromatography)，待分离[[化合物]]在固定相和流动相间进行分布的技术。易被固定相吸引的成分，其流速较慢；反之易溶于流动相不易进入固定相的成分，其流速较快，因此各待[[分离物]]质洗脱时先后有序得以分离。通常将固定相填装柱中，这称为[[层析]]柱。流动相流经层析柱，分段收集流洗液进行检测。

1855年，德国F.F.龙格将染料混合物滴于滤纸上，注意到不同颜色环的形成。1897年D.T.戴首先用填充石灰石的层析柱以分段分离粗[[石油]]制品。此后，不同性质的层析技术不断创建，应用十分广泛，不仅在[[生物]]活性物质的分离、分析、[[纯化]]、制备中不可或缺，临床医学中也可利用高效液相层析法检测[[体液]]中含量极微、难以用一般[[化学]]方法分析的许多[[激素]]、[[维生素]]、[[代谢物]]、药物和毒物等。

==原理==

按照待分离化合物与固定相／流动相的相互作用性质的不同，层析原理也各异。①[[吸附层析]]。待分离物质被固定相吸附，然后用流动相洗脱之，混合物中各成分洗脱次序的先后，决定于它在固定相中吸附的能力及在流动相中的溶解度。常用的固相吸附剂有氧化铝、[[活性炭]]、[[淀粉]]、[[羟磷灰石]]等。[[洗脱液]]多用苯、石油醚等有机溶剂，或缓冲[[盐溶]]液。②分配层析。待分离物质在两种互不混溶的液相中进行分配，其中一种液相束缚于惰性支持物上，成为固定相;另一液相则为流动相。当流动相流经固定相时，易溶于流动相（不易溶于固定相）的物质乃先行洗脱。常用的能束缚液相的惰性支持物有滤纸、[[硅胶]]、纤维素等。③[[凝胶]]过滤层析。由[[交联葡聚糖]]、[[琼脂糖]]或[[聚丙烯酰胺凝胶]]等惰性介质，制成不同孔径的微小颗粒，悬浮成胶。当待测物质流经层析柱时，[[分子]]小者可钻入胶粒的小孔内，在流洗过程中，流洗出来较晚;而分子大者不能（或不易）进入胶粒的小孔内，将随流洗液较早地被流洗出来。因此层析柱可起到分子筛的作用。④离子交换层析。[[解离]]基团结合在固定相中，在一定pH下带一定的电荷（如阳电荷）；待分离化合物中在此pH下带有相反的电荷者（如阴离子），即可与之相互吸引而滞留，然后可改变流洗液的pH或离子强度以洗脱之。待分离化合物中的阴离子能被吸引滞留者，称阴离子交换层析，反之则为阳离子交换层析。新设计的[[聚焦]]层析，可按各[[蛋白质]][[等电点]]的不同而一一分离之。⑤亲和层析。利用[[抗原]]－[[抗体]]，酶与抑制物或[[配体]]与[[受体]]间的特异性的高度亲和力，可以将一方（如抗体）结合于固定相中，用以分离相对应的另一方（如相应的特异抗原），然后通过改变流洗液的pH值及/或离子强度以解离特异性结合的物质（如抗原）。

==种类==

可按以下四个标准分类：①按待分离化合物与固定相/流动相的相互作用的性质区分，可分成吸附层析、分配层析、凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析、疏水相互作用层析、共价层析及聚焦层析等。②按固定相与流动相状态的不同，可分成固－液体系（如吸附层析）、液－液体系(如分配层析)及气－液体系（即流动相为气相的[[气相层析]]）。③按流洗压力的不同，可分成常压、中压及[[高压]]液相层析。④按固相支持物填装方式的不同，填装成柱者称[[柱层析]](见图)，平铺在薄板上者称[[薄层层析]]。

自从[[高效液相层析]]问世以来，层析技术获得革命性的变化，不仅可在较短时间内，高效、精细地分析微量物质，还能快速分离纯化较大规模的制备量。将高效液相层析与质谱联用，气相层析与质谱联用(GC-MS)，或层析与[[电泳]]联用，则效果更佳。

层析 - 版本历史

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