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2014-02-05T06:40:47Z

以“1，反转录酶（Reverse transcriptase）是以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA（cDNA）的酶。哺乳类C型病毒...”为内容创建页面

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1，[[反转录酶]]（Reverse transcriptase）是以RNA为模板指导三磷酸[[脱氧核苷]]酸合成互补DNA（cDNA）的酶。哺乳类C型[[病毒]]的反转录酶和鼠类B型病毒的反转录酶都是一条[[多肽]]链。鸟类RNA病毒的反转录酶则由两上[[亚基]]结构。[[真核生物]]中也都分离出具有不同结构的反转录酶。这种酶需要镁离子或锰离子作为辅助因子，当以mRNA为模板时，先合成[[单链]]DNA（ssDNA），再在反转录酶和DNA[[聚合酶]]Ⅰ作用下，以单链DNA为模板合成“发夹”型的双链DNA（dsDNA），再由[[核酸酶]]S1切成二条单链的双链DNA。因此，反转录酶可用来把任何[[基因]]的mRNA[[反转录]]成cDNA拷贝，然后可大量[[扩增]]插入载体后的cDNA。也可用来标记cDNA作为[[放射性]]的[[分子]][[探针]]。

2，反转录酶具有的[[酶活性]](三种酶活性) 大多数反转录酶都具有多种酶活性，主要包括以下几种活性。①DNA聚合酶活性；以RNA为模板，[[催化]]dNTP聚合成DNA的过程。此酶需要RNA为[[引物]]，多为[[色氨酸]]的tRNA，在引物tRNA3′－末端以5′→3′方向合成DNA。反转录酶中不具有3′→5′外切酶活性，因此没有校正功能，所以由反转录酶催化合成的DNA出错率比较高。②RNase H活性；由反转录酶催化合成的cDNA与模板RNA形成的杂交分子，将由RNase H从RNA5′端水解掉RNA分子。③DNA指导的DNA聚合酶活性；以反转录合成的第一条DNA单链为模板，以dNTP为[[底物]]，再合成第二条DNA分子。除此之外，有些反转录酶还有DNA[[内切酶]]活性，这可能与[[病毒基因]]整合到[[宿主]][[细胞]][[染色体]]DNA中有关。反转录酶的发现对于[[遗传工程]]技术起了很大的推动作用，目前它已成为一种重要的工具酶。用组织细胞提取mRNA并以它为模板，在反转录酶的作用下，合成出互补的DNA(cDNA)，由此可构建出cDNA文库(cDNA library)，从中筛选特异的目的基因，这是在[[基因工程]]技术中最常用的获得目的基因的方法。

3，反转录酶的作用过程:反转录酶的作用是以dNTP为底物，以RNA为模板，tRNA(主要是色氨酸tRNA)为引物，在tRNA3′桹H末端上，按5′→3′方向，合成一条与RNA模板互补的DNA单链，这条DNA单链叫做互补DNA(complementary DNA, cDNA)，它与RNA模板形成RNA桪NA杂交体。随后又在反转录酶的作用下，水解掉RNA链，再以cDNA为模板合成第二条DNA链。至此，完成由RNA指导的DNA合成过程。

4，反转录酶的发现:1970年Temin等在致癌RNA病毒中发现了一种特殊的DNA聚合酶，该酶以RNA为核板，根据[[碱基配对]]原则，按照RNA的[[核苷酸]]顺序(其中V与A配对)合成DNA。这一过程与一般[[遗传信息]]流转录的方向相反，故称为反转录，催化此过程的DNA聚合酶叫做反转录酶(reverse transcriptase)。后来发现反转录酶不仅普遍存在于RNA病毒中，哺乳动物的[[胚胎细胞]]和正在分裂的[[淋巴细胞]]中也有反转录酶。

[[分类:生物化学]][[分类:生物]][[分类:化学]][[分类:基因]]

反转录酶 - 版本历史

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