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2014-01-26T04:54:07Z

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{{百科小图片|bk8mi.jpg|}}[[抗体]]是由B[[淋巴细胞]][[分化]]形成的[[浆细胞]]合成、分泌的。每一个B淋巴细胞在成熟的过程中通过随机重排只产生识别一个抗原的[[抗原受体]][[基因]]。动物[[脾脏]]有上百万种不同的B淋巴细胞系，重排后具有不同基因不同的B淋巴细胞合成不同的抗体。当机体受抗原刺激时，[[抗原]]分子上的许多[[抗原决定簇]]分别激活各个具有不同基因的B[[细胞]]。被激活的[[B细胞]]分裂[[增殖]]形成效应B细胞（浆细胞）和记忆B细胞，大量的[[浆细胞]]克隆合成和分泌大量的抗体分子分布到[[血液]]、体液中。如果能选出一个制造一种专一抗体的浆细胞进行培养，就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群，即单克隆。单克隆细胞将合成针对一种抗原决定簇的抗体，称为'''单克隆抗体'''。　　
==单克隆抗体技术的基本原理==
要制备单克隆抗体需先获得能合成[[专一性]]抗体的单克隆B淋巴细胞，但这种B淋巴细胞不能在体外生长。而实验发现[[骨髓瘤细胞]]可在体外生长繁殖，应用[[细胞杂交]]技术使骨髓瘤细胞与免疫的淋巴细胞二者合二为一，得到杂种的骨髓瘤细胞。这种杂种细胞继承两种[[亲代]]细胞的特性，它既具有B淋巴细胞合成专一抗体的特性，也有骨髓瘤细胞能在体外培养增殖永存的特性，用这种来源于单个融合[[细胞培养]]增殖的细胞群，可制备抗一种抗原决定簇的特异单克隆抗体。

单克隆抗体是仅由一种类型的细胞制造出来的抗体，对应于[[多克隆抗体]]/多株抗体——由多种类型的细胞制造出来的一种抗体。{{百科小图片|bk8mj.jpg|单克隆抗体技术过程简图}}单克隆抗体由可以制造这种抗体的免疫B细胞与骨髓瘤细胞融合后的细胞产生的，这种融合细胞即具有瘤细胞不断分裂的能力，又具有[[免疫细胞]]能产生抗体的能力。融合后的[[杂交细胞]](杂种瘤)可以产生大量相同的抗体。当其应用于医疗中时，在识别抗原中的显示的微小变化(如果有的话)有助于减小[[副作用]]。

1975年，德国科学家乔治.克勒和阿根廷科学家凯撤.米尔斯坦，把产生抗体的B淋巴细胞与[[多发性骨髓瘤]]细胞进行融合，形成[[杂交瘤]]细胞。这种细胞兼有两个亲代细胞的特征，既有骨髓瘤细胞无限增殖的能力，又有B淋巴细胞产生抗体的功能。因此，这种杂交瘤细胞就能在细胞培养中产生大量单一类型的高纯度抗体。这种抗体叫“单克隆抗体”。

==单抗隆抗体的制备==
===杂交瘤细胞的大量繁殖===
克隆化的[[细胞]]可以在体外进行大量培养，收集上清液而获得大量的单一的克隆化[[抗体]]。不过体外培养法得到的单克隆抗体有限，其不能超过特定的细胞浓度，且每天要换[[培养液]]。而体内杂交瘤细胞繁殖可以克服这些限制。杂交瘤细胞具有从亲代[[淋巴细胞]]得来的肿瘤细胞的遗传特性。如接种到组织相容性的同系小鼠或不能排斥杂交瘤的小鼠（无胸腺的裸鼠），[[杂交瘤细胞]]就开始无限地繁殖，直至宿主死亡。产生[[肿瘤细胞]]的小鼠腹水和[[血清]]中含有大量的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体，这种抗体的效价往往高于培养细胞上清液的100~1 000倍。

利用[[免疫抑制剂]]，如降植烷、液体石蜡、抗淋巴细胞血清等，可以加速和促进肿瘤的生长。

1．材料
#经[[高压灭菌]]的降植烷。
#Balb/c鼠：5~8周龄。
#杂交瘤细胞：取对数生长期的细胞。
#RPMI—1640[[培养液]]
#[[新生牛血清]]

2．操作方法
#于小鼠腹腔注射0.5ml[[降植烷]]，注射后１～９周内种植细胞。
#收取对数生长期的杂交瘤细胞，用５％FCS—1640液洗涤一次，1 000r/min离心10min。
#取样，用[[台盼兰]]染色，计活细胞数，重新用５％FCS—1640液配成1.0×107细胞/ml的悬液。
#给注射了降植烷的小白鼠接种杂交瘤细胞，每只腹腔注射1ml（含1.0×107个细胞/ml）。
#接种后10天左右时间肿瘤体积最大，此时可由腹腔抽取腹水，每隔1~3天取1次，可取10次。血清可由腋下动脉或心脏采血后分离。

===单克隆抗体的提纯===
1．材料
#20mMol/L pH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液,20 mMol/L NaCl
#20mMol/L pH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液,40mMol/L NaCl
#20mMol/L pH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液,80 mMol/L NaCl
#20mMol/L pH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液
#饱和硫酸铵液
#DEAE—纤维素柱

2．操作方法
#小鼠腹水用冷PBS液稀释4倍后，于1.00×105转离心30min，去沉淀。
#在4℃于上清中缓缓滴加饱和硫酸铵液，边加边搅拌，使溶液最终为50％硫酸铵浓度。
#此溶液置冰中30min~60min，然后5 000r/min离心10min，去上清。
#将沉淀溶于Tris－HCl缓冲液（40mMol/L NaCl）中（溶液可能混浊）。
#装入透析袋于Tris－HCl缓冲液（20 mMol/L NaCl）中透析除盐。
#离心去沉淀。
#溶液稀释（1:100或更高倍稀释）后，于280nm测蛋白含量，估计蛋白质含量. 1A 280unit=0.8mg蛋白质。一般每ml腹水中，含有总蛋白约25mg~36mg。
#过DEAE—纤维素柱：纤维素柱高40cm，以20mMol/L NaCl Tris缓冲液平衡。透析样品以Tris缓冲液等量稀释。

样品进入柱床速度为1ml~2ml/min，以NaCl线形梯度洗脱。大部分单克隆IgG于40 mMol/L和80mMol/L NaCl洗脱，也有极少例外的单克隆抗体于120 mMol/L ~150 mMol/L NaCl洗脱。

测OD280nm收集蛋白峰，单克隆IgG保存备用。

杂交瘤产生各种免疫球蛋白，但主要是IgG和IgM，究竟是哪种为主，则决定于抗原的免疫程序。免疫一次，且3天后就取脾，多为产生IgM的B淋巴细胞。免疫多次的多为IgG。
===单克隆抗体的鉴定===
#[[杂交瘤细胞]]染色体的检查采用[[秋水仙素]]裂解法进行。
#单克隆抗体的类型、亚型的测定：购买兔抗小鼠Ig类型和亚型的标准抗血清，采用琼脂扩散法或ELISA夹心法测定单抗的Ig类型和亚型。
#单抗的特异性鉴定可以采用各种方法，如[[免疫荧光法]]、[[ELISA法]]、间接血凝和[[免疫印迹技术]]等，同时还需做免疫阻断试验等。
#单抗的效价测定可采用[[凝集反应]]、ELISA或[[放射免疫]]测定。不同的测定方法效价不同。培养上清液的效价远不如腹水的效价。采用凝集反应，腹水效价可达5×104。而采用ELISA检查，腹水效价可达1.0×106。单抗的效价以培养上清和腹水的稀释度表示。
#必要时还可以测定单抗的亲和力和识别抗原表位的能力测定。　　
==医学用途==
把单克隆抗体与[[抗癌药物]]或[[毒素]]结合起来，就成为威力强大的抗体“生物导弹”。把这种抗体“导弹”注射到[[癌症]]患者的血液中，它就会发挥导弹样的作用，在患者体内追踪并附着于癌细胞上，然后与抗体结合的抗癌药物或毒素杀伤和破坏癌细胞，而且很少损伤正常组织细胞。这种抗体“导弹”具有高度选择性，对癌细胞命中率高，杀伤力强的优点，没有一般化学药物那样不分好坏细胞，格杀勿论的缺点。美国约翰.霍普金斯医院应用抗体“导弹”治疗[[晚期]][[肝癌]]病人，收到惊人效果。[[肝脏]]肿[[癌]]显著缩小，生存期延长，而且没有副作用。单克隆抗体技术的发明，是免疫学中的一次革命，打破了过去只能在身体内产生抗体的方法，而成功地在体外用细胞培养的方法产生抗体，同时繁殖快，可以产生在体内达不到的高[[滴度]]和高专一性的水平。它来自于每一个细胞，所以非常纯净。

单克隆抗体在疾病的诊断和治疗预防方面，与常规的抗体相比，特异性强，灵敏度高，优越性非常明显，可利用此特性制成“生物导弹”用来运送药物至病害部位，主要是癌细胞。在生物导弹中，能识别抗原的单克隆抗体充当瞄准镜，将抗癌药物（弹头）传送到癌细胞，从而使抗癌药物发挥药效。

[[分类:生物]][[分类:分子生物学]][[分类:细胞工程]][[分类:抗体]]
==参看==
*[[医学免疫学/单克隆抗体|《医学免疫学》- 单克隆抗体]]

单克隆抗体 - 版本历史

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