112.247.109.102：以“是将免疫学基本原理与细胞化学技术相结合所建立起来的新技术，根据抗原与抗体特异性结合的特点，检测细胞...”为内容创建页面

2014-01-27T04:54:49Z

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是将[[免疫学]]基本原理与[[细胞化学]]技术相结合所建立起来的新技术，根据[[抗原]]与[[抗体]]特异性结合的特点，检测细胞内某种[[多肽]]、[[蛋白质]]及膜[[表面抗原]]和[[受体]]等大分子物质的存在与分布。[[肽]]类与蛋白质种类繁多，均具有[[抗原性]]，当将人或动物的某种肽或蛋白质作为抗原注入另一种动物体内，则产生与该抗原相应的[[特异性抗体]]（[[免疫球蛋白]]）；将抗体从[[血清]]中提出后，结合上某种[[标记物]]，即成为标记抗体。用标记抗体与[[组织切片]][[标本]]孵育，抗体则与[[细胞]]中相应抗原发生特异性结合，结合部位被标记物显示，则在[[显微镜]]下观察到该肽或蛋白质的分布。用[[荧光素]]（常用异硫氰酸）标记抗体，并于[[荧光显微镜]]下观察，称[[免疫荧光]]术。如抗体与[[辣根]]过氧化物酶（horse radish peroxidase， HRP）等结合，进行酶显示后，可在光镜或电镜观察，用于电镜者则称为免疫电镜术（immunoelectronmicroscopy)此外，以铁蛋　标记抗体白标记抗体，称[[铁蛋白]]标记法,也能用于电镜下观察。　　
==标记抗体与抗原结合方式==
标记抗体与抗原结合方式主要有两种：①直接法：用标记抗体与抗体中的相应抗原直接结合，操作方法简便，特异性高，但敏感性较差，此法可用于[[检定]]未知抗原；②间接法：先用未标记的具有特异性的第一抗体与样品中的相应抗原结合，然后再以标记的第二抗体与特异性的第一抗体结合；第二抗体是用第一抗体作为抗原注入另一动物体内诱导产生的抗体，然后再结合以标记物。通过这样的放大作用，使抗原[[分子]]上的标记物大大增多，故间接法较直接法的敏感性大为增高，约高5～10倍，故应用更为广泛。间接法中较常用的，如[[过氧化物酶]]-抗过氧化物酶[[复合物法]](peroxidase anti-peroxidase complexmethod，　标记方法PAP法)，该法除需一抗和二抗外，还需要制备HRP标记的抗酶抗体,即以HRP作为抗原[[免疫]]动物，制成抗HRP抗体，再以HRP对标记该抗体，制成稳定的环形PAP[[复合物]]。标本先后经一抗、二抗和PAP复合物处理后再以DAB显色抗原存在部位可见棕黄色产物。　　
==免疫细胞化学的发展==
近10年来，[[免疫细胞]]学技术有了很大进展，各种新方法相继建立。[[单克隆抗体]] （monoclonal antibody）制备技术极大地提高抗体的特异性与免疫组化[[染色]]的精确性。继PAP法之后由于[[生物素]]-亲合素等[[试剂]]的应用，为检测微量抗原、受体、抗体提供了更精确的技术。目前常用的生物素-亲合方法有:标记亲合素-[[生物素法]](labelled avidin-biotin method LAB法)、桥连亲合素-生物素法（bridged avidin-biotin method, BAB法)及亲素-生物素-过氧化物酶复合物法(avidin-biotin-peroxidase complex method，ABC法)；现市上有配制成的ABC药盒供应，使用简便，是目前广泛应用的一种方法。

[[分类:生物化学]][[分类:生物]][[分类:化学]]

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