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2014-01-26T14:24:12Z

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大多数测定[[标本]]不是纯酶制剂，而是体液或[[组织液]]。其中除了测定酶外，还存在着其它酶和各种物质，如使用酶[[偶联]]反应，在反应体系中又外添了大量的各种酶制剂，因此在反应体系中可能出现一些我们不希望的[[副反应]]或旁路反应，这些都有可能对测定反应产生干扰。

（一）其它酶和物质的干扰

如组织[[匀浆]]中往往含有NADH-[[细胞色素C]][[还原酶]]，它将干扰各种还原酶的测定。临床酶测定中最典型的例子是[[血液]]中[[丙酮]]酸对[[丙氨酸氨基转移酶]]测定的干扰，由于反应体系中含有大量[[乳酸脱氢酶]]和NADH，可与丙酮酸反应消耗NADH，引起340nm处吸亮度下降，假如将此NADH下降也算为[[ALT]]活性将引起误差。其它如[[红细胞]]中[[腺苷酸激酶]]（AK）对[[CK]]测定的干扰，在CK的酶偶联体系中ADP是CK[[底物]]，但它又同时是AK的底物，二个[[酶反应]]都产生[[ATP]]，在工具酶（[[已糖]][[激酶]]和6-[[磷酸葡萄糖脱氢酶]]）作用下都产生NADH引起340nm处吸光度上升，其结果是CK测定结果偏高，为避免此种干扰，所以在反应体系中加入AK的[[抑制剂]]AMP和二[[腺苷酸]]5′[[磷酸]]。

（二）工具酶的污染

目前[[试剂]]中所用的试剂酶多从动物组织或[[细菌]]中提取，不可避免地会污染有其它酶，如不注意此问题，会引起不正确结果，例如丙酮酸[[羧化酶]][[催化]]下列反应：

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可加入[[苹果]]酸[[脱氢酶]]和NADH进行测定，将[[草酰乙酸]]转变为苹果酸，并将NADH转变为NAP<sup>+</sup>。如果工具酶苹果酸脱氢酶不纯，含有乳酸脱氢酶，也可以作用底物之一的丙酮酸，同时消耗NADH，这样就无法准确测定丙酮酸羧化酶活性。

更有甚者，有些工具酶中就混有测定酶，这种情况下，将产生很高的[[本底]]。

所以所用的工具酶必须很纯，并检查污染酶的含量，例如测定[[天冬氨酸]][[氨基转移酶]]所用的苹果酸脱氢酶中所含杂的[[AST]]时，按IFCC规定不应超过0.005％。

（三）非酶反应

有些底物不稳定，没有酶的作用就能自行反应，例如[[ALP]]的底物磷酸对硝基酚配成的底物溶液，室温放置过夜，即自行水解释放出对硝基成黄色。又如测[[醛缩酶]]时，其底物醛类化合物可以和NAD<sup>+</sup>起非酶反应产生一种具有类似NADH吸收光谱的[[化合物]]，给测定带来困难。

（四）分析容器的污染

如冲洗不当，分析容器和管道中混杂有各种物质，可能影响[[酶活性]]，如微量重金属可使酶[[失活]]，残留的[[表面活性剂]]可能抑制酶活性。

（五）沉淀形成

使用光学法监测酶反应时，如有沉淀形成或组织匀浆中颗粒的下沉都会引起吸光度变化，引起测定结果误差，此情况常见于底物溶解度低而反应体系中底物浓度偏高。可见于用γ-谷氨酰[[对硝基苯胺]]为底物测GGT时。

对上述的一些问题常可通过试剂空白管检出并加以校正。不同厂家的ALT，AST[[试剂盒]]由于杂酶存在，试剂空白管可以测出多少不等[[转氨酶]]活性，个别可达5U/L以上，这种试剂无法使用，较好的试剂盒也在2U/L左右。如不作试剂空白管对结果加以校正，所测结果将偏高，用半自动分析仪测定酶时特别要注意作试剂空白管，有时还需作标本对照管，例如测ALT时为除去GLD的干扰，可以在底物溶液中不加入[[丙氨酸]]，与标本中GLD作用引起NADH下降。

解决这些问题另一个有效措施就是不用单一试剂测酶活性，改用双试剂，先加的第一试剂常不含底物或底物之一，但含有所有其它成分，与标本作用一段时间待吸光度停止变化后，再加入底物开始测定酶的反应。
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临床生物化学/连续监测法中的干扰因素及其控制 - 版本历史

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